Cilindri di clonaggio da laboratorio: come isolare singole colonie cellulari?

Indispensabili in coltura cellulare, i cilindri per clonaggio consentono di isolare una colonia aderente per ottenere una linea monoclonale dopo trasfezione, editing CRISPR, fusione di ibridomi o selezione con antibiotico. Posizionati attorno al clone, creano una zona a tenuta di liquido per l’azione di un agente dissociante (tripsina/EDTA) e permettono il trasferimento senza contaminazioni crociate. Disponibili in vetro borosilicato riutilizzabile o in plastica sterile pronta all’uso, con diversi diametri e profili del bordo, mettono in sicurezza le fasi critiche e rendono più fluido il lavoro al bancone.

Quali sono le diverse tipologie di cilindri per clonaggio?

Un cilindro di clonaggio (o anello di clonaggio) si posa attorno a una colonia aderente per isolarla dal resto del monostrato. Un sottile strato di grasso di silicone sterile (o una base adesiva, a seconda del modello) garantisce la tenuta; si aggiunge il reagente di dissociazione e quindi si recupera la colonia in sospensione per riseminarla in un pozzetto pulito.

Due famiglie principali:
• Vetro borosilicato: robusto, riutilizzabile, autoclavabile, bordi lucidati o smussati per un appoggio stabile. Eccellente resistenza chimica e visibilità.
• Plastica sterile (spesso polistirene): monouso, pronta all’uso, limita le contaminazioni crociate e fa risparmiare tempo. Versioni adesive disponibili per evitare il grasso.

Criteri di scelta:
• Diametro interno (tipicamente da 3 a 10 mm) in linea con la dimensione della colonia e la geometria di piastra o capsula.
• Altezza e finitura del bordo (piano o smussato) per ottimizzare la tenuta e l’accesso della pipetta.
• Sterilità, confezionamento (singolo, multipack), certificazioni (privo di DNasi/RNasi, apirogeno).
• Compatibilità con agenti di dissociazione e superfici trattate per coltura cellulare.
• Impatto ambientale: vetro riutilizzabile (meno rifiuti), plastica sterile per assenza di riprocessi e tracciabilità.

Tipo	Principio	Applicazioni
Vetro borosilicato	Riutilizzabile, autoclavabile, bordi lucidati	Clonaggio intensivo, protocolli impegnativi, solventi
Plastica sterile	Monouso, pronta all’uso	Serie rapide, flussi GMP-like, quando c’è rischio di contaminazione
Plastica adesiva	Base adesiva, senza grasso	Superfici delicate, risparmio di tempo, formazione

In quali ambiti di applicazione si utilizza un cilindro di clonaggio?

Nelle scienze della vita e nella biotecnologia viene impiegato per ottenere linee cellulari monoclonali stabili dopo trasfezione o genome editing. In ambito farmaceutico è utile per la selezione di cloni produttori (ibridomi, cellule CHO) nella produzione di anticorpi. Nella ricerca accademica e nelle CRO accelera la selezione di cloni CRISPR, l’isolamento di sottopopolazioni e la standardizzazione dei saggi. In virologia aiuta nel prelievo di placche isolate. In cosmetica e tossicologia facilita la creazione di colture omogenee per test riproducibili. Alcuni laboratori di controllo qualità lo utilizzano per stabilizzare linee cellulari di riferimento e aumentare l’affidabilità dei saggi biologici.

I diversi cilindri per clonaggio disponibili

Domande frequenti sui cilindri per clonazione

Come scegliere il diametro giusto del cilindro?
Scegliete un diametro di 1–2 mm superiore alla colonia per garantire la tenuta e far passare la punta della pipetta senza tagliare il monostrato cellulare.

Vetro o plastica: cosa privilegiare?
Il vetro è durevole, autoclavabile e chimicamente inerte. La plastica sterile fa risparmiare tempo, riduce le contaminazioni ed è adatta a lotti monouso.

Come assicurare una buona tenuta?
Applicate un sottile anello di grasso di silicone sterile, posizionate senza premere troppo ed eliminate le bolle. Le versioni adesive evitano di usare grasso su superfici sensibili.

Posso usarli con reagenti diversi dalla tripsina?
Sì. EDTA, Accutase o enzimi delicati sono adatti a seconda della linea cellulare. Verificate la compatibilità con la superficie di coltura e la cinetica di distacco.

Come sterilizzare un cilindro in vetro?
Pulite, risciacquate abbondantemente e poi autoclavatelo. Il vetro borosilicato tollera anche una rapida passata alla fiamma. Evitate abrasivi che rigano e trattengono contaminanti.

I modelli in plastica sono riutilizzabili?
No. In genere sono monouso e forniti sterili. Il riutilizzo aumenta il rischio di contaminazione e di deformazioni durante la pulizia.

Gli adesivi comportano un rischio per le cellule?
I modelli di qualità impiegano adesivi a bassa citotossicità. Lasciate adsorbire per qualche secondo ed evitate lo scorrimento per limitare lo stress cellulare.